Memperbanyak Sel Kompeten

Bagi kita yang sering berurusan dengan plasmid, keberadaan sel kompeten menjadi sangat vital. Sayangnya, harga sel kompeten tidak murah. Untuk menghemat, ada baiknya kita memperbanyak dan mempersiapkan sendiri sel kompeten tersebut. Berikut cara memperbanyak dan mempersiapkan sel kompeten E. coli untuk electroporation yang sering saya lakukan (metode Chen and Okayama).

1. Ambil sel kompeten (sebagai contoh disini: E.coli XL-1 blue) dari tempat penyimpanan (biasanya freezer -80 derajat Celcius atau yang menggunakan nitrogen cair), masukkan ke wadah berisi es, tunggu (5-6 menit) sampai mencair, masukkan ke medium SOC steril yang sudah dihangatkan (37 derajat Celcius), lalu masukkan ke incubator shaker 37 derajat Celcius. Satu jam kemudian, sebarkan di petri agar LB yang mengandung antibiotik yang sesuai (Tetrasiklin), inkubasi selama 12-16 jam di inkubator 37 derajat Celcius.

2. Ambil 1 koloni, masukkan ke 10-15 mL medium SB steril yang mengandung antibiotik yang sesuai (Tetrasiklin), inkubasi di incubator shaker 37 derajat Celcius selama 12-16 jam.

3. Siapkan 1 liter medium SB steril yang mengandung antibiotik yang sesuai (Tetrasiklin). Pindahkan koloni kuman di atas ke dalam 1 liter medium SB ini, campur via pipeting, lalu bagi kedalam 5 botol plastik yang sudah disterilisasi, lalu masukkan ke incubator shaker 37 derajat Celcius, sampai mencapai OD 0,6-1 (ukur dengan menggunakan spectrophotometer dengan wavelength 600 nm).

4. Pusingkan selama 15 menit, 4.700 rpm (dengan menggunakan rotor Beckman JA-10), 4 derajat Celcius, lalu buang supernatan.

5. Resuspen pelet dengan menggunakan 160 mL HEPES atau mEq steril, lalu pusingkan selama 15 menit, 4.700 rpm, 4 derajat Celcius, lalu buang supernatan.

6. Resuspen pelet dengan menggunakan 160 mL HEPES atau mEq steril, lalu pusingkan selama 10 menit, 4.700 rpm, 4 derajat Celcius, lalu buang supernatan.

7. Resuspen pelet dengan menggunakan 160 mL HEPES atau mEq steril, lalu pusingkan selama 10 menit, 4.700 rpm, 4 derajat Celcius, lalu buang supernatan.

8. Resuspen pelet dengan menggunakan 80 mL HEPES atau mEq steril, lalu pusingkan selama 10 menit, 4.700 rpm, 4 derajat Celcius, lalu buang supernatan.

9. Resuspen pelet dengan menggunakan 40 mL HEPES atau mEq steril, lalu pusingkan selama 10 menit, 3.500 rpm (dengan menggunakan rotor TOMY TS-7), 4 derajat Celcius, tanpa brake, lalu buang supernatan.

10. Resuspen dengan 20 mL gliserol 10 % steril, lalu pusingkan selama 10 menit, 3.500 rpm, 4 derajat Celcius, tanpa brake, lalu buang supernatan.

11. Resuspen dengan 2 mL gliserol 10 % steril, lalu bagi ke dalam eppendorf tube yang sudah disterilkan dan didinginkan di es, 0,055 mL per eppendorf tube. Sesegera mungkin masukkan ke lemari beku (-80 derajat Celcius) atau lemari penyimpan dengan menggunakan nitrogen cair.

Untuk transformasi “plasmid sulit” (karena ukurannya yang relatif besar, misalnya), memang lebih baik kita menggunakan sel kompeten yang baru, bukan hasil perbanyakan sendiri, karena efisiensinya dijamin oleh perusahaan (dengan kata lain, kalau gagal kita dapat melakukan komplain*smile*). Untuk kegiatan sehari-hari, sel kompeten hasil perbanyakan sendiri ini sudah lebih dari cukup, dan transformasi efisiensinya cukup tinggi. Kata rekan saya, biaya riset yang dihemat dengan memperbanyak sendiri sel kompeten ini sebesar 6-10 juta rupiah. Lumayan, bukan?

4 Responses to “Memperbanyak Sel Kompeten

  • assalamu’alykum. Blogwalking dok, sy coas D RSDM. minta izin buat nge-link blognya ya

    afie: WassWrWb
    Silakan, dengan senang hati *smile*

  • Asslm. Mo minta tlg ni, gmana cara agar saya bisa dpt kursus bahasa Jepang gratis (kalo bisa sih kursusnya di Jepang, yg non gelar). Tlg, infonya juga, kalo ada info profesor Jepang yang punay proyek ttg “Ecotourism” tlg segera kabari yaaa….Saya pingin banget lanjut studi ke Jepang….Plissss Jazkm kh katsira

    afie: WassWrWb Ibu/Mbak Siska, silakan melihat pengumuman di http://www.id.emb-japan.go.jp/sch_js.html

  • assalamu’alaikum.

    MO mnta tlg ne mas.
    saya butuh informasi tentang beberapa protokol penyiapan kompeten sel tuk jadi referensi.

    thanks for info.

    wassalamualaikum

    afie: WassWrWb Mas Bud. Silakan ikuti blog ini dalam beberapa hari kedepan. InsyaAllah akan saya sampaikan cara penyiapan berikut cara transformasinya. Saya punya banyak koleksi protokol 🙂

  • boleh minta tlg

    aku boleh minta jurnal tentang sel kompeten??????

    buat laporan praktikum nich………

    makasih sebelumnya

    afie: maksudnya gimana, mas, sorry gak jelas. Jurnal ttg sel kompeten itu ribuan. Mau mbahas ttg apa?

Leave a Reply

Your email address will not be published. Required fields are marked *


*

Skip to toolbar