Transformasi Plasmid DNA ke dalam Sel Kompeten Metode CaCl2

Transformasi sel kompeten E. coli dengan metode CaCl2 pertama kali diperkenalkan oleh Mandel dan Higa (1970). Metode ini cukup efisien dan tidak membutuhkan alat khusus. Dagert dan Ehrlich (1974) memodifikasi metode ini dengan meningkatkan lama paparan sel terhadap CaCl2. Kushner (1978) berusaha meningkatkan efisiensinya dengan menggantikan kalsium dengan kation lainnya . Sedangkan Hanahan (1983) menambahkan beberapa senyawa lain untuk meningkatkan efisiensinya. Protokol di bawah adalah protokol dasar yang relatif tidak rumit.

1. Siapkan 10 ng DNA yang akan ditransformasikan (volume DNA 0,01-0,025 mL). Masukkan ke dalam 15 mL round-bottom test tube. Letakkan di bak yang berisi es.

2. Ambil sel kompeten yang sudah dipersiapkan, cairkan dengan cara dihangatkan dengan tangan, lalu ambil 0,1 mL sel kompeten dan segera masukkan ke dalam tube berisi DNA di atas. Goyang-goyang tabung agar DNA dan sel kompeten tercampur rata, lalu letakkan di bak yang berisi es selama 10 menit. Buang sisa sel kompeten yang tidak terpakai (jangan dibekukan ulang).

3. Berikan kejutan panas dengan menempatkan tube berisi DNA dan sel kompeten tersebut ke dalam inkubator air 42 derajat Celcius selama 2 menit ATAU masukkan ke dalam inkubator 37 derajat Celcius selama 5 menit.

4. Tambahkan ke dalam tube tersebut 1 mL medium LB. Inkubasi di incubator shaker (250 rpm) 37 derajat Celcius selama 1 jam.

5. Sebarkan ke petri agar LB yang mengandung antibiotik yang sesuai. Inkubasi 37 derajat Celcius selama 12-16 jam.

Transformasi plasmid DNA ke dalam sel kompeten dengan metode CaCl2 mudah bukan?

Daftar pustaka:

Dagert, M and Ehrlich, SD. 1974. Prolonged incubation in calcium chloride improves competence of Escherichia coli cells. Gene. 6:23-28.

Hanahan, D. 1983. Studies on transformation of Escherichia coli with plasmids. J Mol Biol.166:557-580.

Kushner SR. 1978. An improved method for transformation of Escherichia coli with ColEI derived plasmids. In: Genetic Engineering (Boyer, HW. and Nicosia, S. eds). Elsevier/North Holland, Amsterdam. pp 17-23.

Mandel, M. and Higa, A. 1970. Calcium-dependent bacteriophage DNA infection. J. Mol. Biol. 53:159-162.

Ausubel, I. and Frederick, M. 1990. Current protocols in molecular biology. Greene Publishing Associates and Wiley-Interscience.

One Response to “Transformasi Plasmid DNA ke dalam Sel Kompeten Metode CaCl2

  • aslmkm..

    mas, ada masalh dikit ne…
    sekuens hasil transformasi yang saya dapat berbeda dengan yang di kerjakan…

    setelah dianalisis ternyata tidak ada kesamaan dengan sekuens yang dikerjakan..

    ada berapa kemungkinannya??

    mohon bantuannya mas..

    itu harus dianalisis mulai dari desain-nya. Kalau saya, sebelum benar2 melakukan konstruk bangun plasmid, saya biasanya cek betul2 semuanya dan kalau perlu pakai simulasi menggunakan software sebelum benar2 melakukan (mengingat bahan2nya mahal2). Saya tidak dapat berkomentar banyak karena detail yang njenengan lakukan tidak disebutkan di sini

Leave a Reply

Your email address will not be published. Required fields are marked *


*

Skip to toolbar