Mempersiapkan Sel Kompeten untuk Transformasi Metode Chung et al (One-step E. coli Transformation)

Chung et al (1989) memperkenalkan metode persiapan dan transformasi yang sangat sederhana. Sederhana karena langkah yang digunakan tidak sebanyak langkah yang diperlukan metode CaCl2 maupun metode elektroporasi. Saya sendiri mulai sering menggunakan metode ini karena alat yang diperlukan sangat minimal. Setidaknya, di tempat saya bekerja di Indonesia, saya pasti akan menggunakan metode ini. Berikut protokolnya:

1. Ambil 1 koloni tunggal sel kompeten E. coli, lalu kultur ke dalam 5-10 mL medium LB. Inkubasikan selama 12-16 jam (semalaman) di incubator shaker 250 rpm 37 derajat Celcius.

2. Encerkan kultur di atas ke dalam medium LB dengan perbandingan 1:100, lalu inkubasikan di incubator shaker 225-250 rpm 37 derajat Celcius sampai mencapai OD 0.3-0.4 (wavelenght 600nm).

3. Tambahkan 2x TSS (transformation and storage solution) yang sudah didinginkan di bak es, sebanyak volume suspensi sel kutur tersebut, campur dengan baik dan diamkan selama 5-15 menit di bak es.

Sel dapat langsung disimpan di lemari beku -80 derajat Celcius atau bisa langsung digunakan untuk transformasi (langkah ke-4).  Efisiensi transformasi dapat ditingkatkan dengan memusingkan sel terlebih dahulu setelah langkah ke-3 di atas. Caranya, pusingkan sel selama 10 menit 1.000 x g dalam suhu 4 derajat Celcius, buang supernatan, dan resuspen pelet dengan 1/10 volume awal suspensi (volume total di langkah ke-3) dengan menggunakan 1x TSS. Lalu lanjutkan ke langkah ke-4.

4. Masukkan 0,1 mL sel kompeten dan 0,1-100 ng DNA ke dalam 15 ml PP-tube (atau yang sejenis )yang sudah didinginkan di bak es. Inkubasi selama 5-60 menit pada suhu 4 derajat Celcius (di bak es).

5. Tambahkan 0,9 mL medium LB yang mengandung 20 mM glukosa dan inkubasikan 30-60 menit 37 derajat Celcius di incubator shaker 250 rpm. Lalu sebarkan di petri agar LB yang mengandung antibiotik yang sesuai.

Mudah, bukan?

Catatan:

– Semua alat dan bahan yang digunakan harus sudah disterilisasi terlebih dahulu.

– 2x TSS: medium LB yang mengandung 10% PEG (polyethylene glycol, MW 3350 atau 8000), 5% DMSO (dimethyl sulfoxide), dan 20-50 mM Mg (MgSO4 atau MgCl2), pH final 6.5

Daftar Pustaka:

Chung, CT., Niemela, SL., Miller, RH. 1989. One-step preparation of competent Escherichia coli: Transformation and storage of bacterial cells in the same solution. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 86:2172-2175.

Chung, CT., and Miller, RH. 1993. Preparation and storage of competent Escherichia cells. In: Methods in Enzymology vol 218. Academic Press, Inc. pp621-627.

Baca juga:

Transformasi plasmid DNA ke dalam sel kompeten metode CaCl2

Transformasi plasmid DNA metode elektroporasi

Minipreparasi (ekstraksi plasmid DNA)

4 Responses to “Mempersiapkan Sel Kompeten untuk Transformasi Metode Chung et al (One-step E. coli Transformation)

  • thanks berad ya mas fie…

    butuh bgt ne info nya..

    budi bwat jadi referensi karya tulis yah..

    ntar mw nanya lagi deh. blh ya…
    jazakallahu khairan

    afie: ngomong2, protokol yg berhubungan dg penyiapan sel kompeten dan transformasi plasmid belum semuanya saya tulis, lho, hehehe.

  • kalo bisa tambahin donk mas…

    kan nambah pengethuan…

    ditunggu ne mas kelanjutanya..

    afie: don’t worry, Mas, semua yg sudah tak pelajari InsyaAllah bakal tak tulis disini, kok. Setidake satu tahun lagi klo mau nyari protokol di bidang biomol silakan nyari disini, hehehe

  • thenkyu banget mas afie….

  • Now we know who the snsieble one is here. Great post!

Leave a Reply

Your email address will not be published. Required fields are marked *


*

Skip to toolbar