Cara Membuat Virus Influenza dengan Metode Genetik Balik (Reverse Genetic)

Membuat virus Influenza? Memang bisa? Bisa. Kita bisa membuat virus Influenza sendiri dengan metode genetik balik (reverse genetic), dengan catatan, kita mempunyai kloning seluruh genom atau cDNA-nya. Metode ini sangat mudah bagi anda yang sudah berpengalaman di dunia biologi molekular, karena hanya membutuhkan beberapa teknik dasar seperti pembuatan cDNA, kloning, menyusun-bangun plasmid, transfeksi, dan lain sebagainya.

Secara garis besar, prosesnya seperti ini. Genom virus Influenza (cDNA) kita sisipkan ke plasmid yang dikendarai oleh promotor RNA polimerase I dan diakhiri dengan pengakhir RNA polimerase I atau sekuens ribozyme. Transfeksi plasmid tersebut ke dalam sel akan menghasilkan transkrip RNA yang memiliki akhiran 5′ (5′-end) dan untuk akhiran 3′-nya (3′-end) akan dihasilkan oleh pengakhir RNA polimerase I atau ribozyme yang dapat membelah secara mandiri. Transkrip RNA polimerase I tidak memiliki cap (tudung) atau mengalami poliadenilasi, sehingga mirip transkrip virus Influenza aslinya. Untuk mendapatkan virus Influenza, kita transfeksikan 8 plasmid yang masing-masing berisi viral RNA plus 4 plasmid yang mengekspresikan polimerase dan protein NP yang dibutuhkan untuk mengawali replikasi virus ke dalam sel eukariotik. Untuk mengurangi jumlah plasmid yang harus ditransfeksikan, kita dapat menggabungkan transkrip RNA polimerase I (untuk sintesis viral RNA) dan transkrip RNA polimerase II (untuk sintesis mRNA) dalam satu cetakan. Cara lain yang lebih efektif adalah dengan menggabungkan ke-8 viral RNA dalam 1 plasmid.

Dengan cara ini, kita dapat mempelajari mekanisme replikasi virus Influenza dengan lebih baik. Metode ini juga mempermudah kita dalam mempelajari fungsi masing-masing protein virus Influenza. Kita juga dapat menciptakan virus Influenza yang dilemahkan yang berguna dalam pembuatan vaksin yang sulit dihasilkan dengan cara konvensional.

Daftar Pustaka:

Fodor E, Devenish L, Engelhardt OG, Palese P, Brownlee GG, Garcia-Sastre A. 1999. Rescue of influenza A virus from recombinant DNA. J Virol. 73:9679-9682.

Hoffmann E, Neumann G, Kawaoka Y, Hobom G, Webster RG. 2000. A DNA transfection system for generation of influenza A virus from eight plasmids. Proc Natl Acad Sci U S A. 97:6108-6113.

Neumann G, Fujii K, Kino Y, Kawaoka Y. 2005. An improved reverse genetics system for influenza A virus generation and its implications for vaccine production. Proc Natl Acad Sci U S A. 102:16825-16829.

Neumann G, Watanabe T, Ito H, et al. 1999. Generation of influenza A viruses entirely from cloned cDNAs. Proc Natl Acad Sci U S A. 96:9345-9350.

9 Responses to “Cara Membuat Virus Influenza dengan Metode Genetik Balik (Reverse Genetic)

  • oooooo virus influenza dapat dibuat tooo?

    afie: tidak cuma virus influenza, mas… 🙂

  • kalo ngilangin nya ada cara yg cepet ga mas?he..
    saya lagi terserang influenza nih 🙁

    afie: banyak makan banyak tidur… 🙂

  • Maaf dok… apa betul virus bisa dibuat, setahu saya memodifikasi saja, misalnya agar patogenesitas virus menjadi berkurang bisa dimodifikasi pada gen yg bertanggungjawab misalnya dg metode reverse genetik tsb. Sejauh ini apa di lab dokter sudah ada fasilitas but keperluan tsb ?

    Salam dan sukses selalu dari jogja

    afie: konteks “membuat” di sini adalah “merubah” dari bentuk genomik menjadi virus infeksius, dan itu sangat bisa. Saya biasanya mengkloning keseluruhan genom isolat virus saya, dan lalu saya simpan dalam bentuk genomik. Bahkan membuat dalam arti sebenarnya juga sangat mungkin. Untuk pertanyaan selanjutnya, lab saya di Jepang fasilitasnya sangat memadai, sedangkan lab saya di UNS sedang menuju ke situ. Salam dan sukses selalu dari solo

  • dalam tulisan ini ada statment “Genom virus Influenza (cDNA) kita sisipkan ke plasmid yang dikendarai oleh promotor RNA polimerase I dan diakhiri dengan pengakhir RNA polimerase I”
    nah, maksudnya RNA polimerase-nya itu punyanya genom virusnya apa plasmid-nya?
    makasi

  • apa bisa dengan sedikit klik kis/kav ,terus pake avast atau avira ilang semua data data ama virus virusnya.

  • terimakasih….

  • Dok

    Ada perdebatan tentang reverse genetic. Disatu pihak menganggap virus yang dihasilkan dgn tehnik ini adalah GMO (genetic modified organism) tapi ada yang menyatakan bukan GMO. Yang mana yang benar??

  • lah memang apa sih yang jadi masalah dengan GMO?

  • Berkujung,,, salam sukses ja buat webmaster,,, sukses selalu 🙂

Leave a Reply

Your email address will not be published. Required fields are marked *


*

Skip to toolbar